超微量分光光度計與蛋白質檢測那點事

超微量分光光度計是實驗室里常見儀器，常被用于檢測核酸的濃度和純度，那么它在蛋白質檢測上的應用呢？

常用的蛋白質吸收波長為280nm，其他常見的顯色法蛋白質檢測所需要的波長為562nm、595nm、650nm等。Microdrop系列超微量分光光度計的檢測波長范圍覆蓋185-910nm，可以覆蓋大部分實驗所需情況，并且內置了直接檢測、BCA法、Bradford法、Lowry法等共6種可選計算方法，其基座模式能夠檢測0.5-2μL的樣本，大大節約了樣本的消耗。

但是在實際使用中，不時會有一些小伙伴發現，檢測出來的結果不準確、不穩定，這是為什么呢？

很大的一個原因是——樣本量。雖然基座檢測時樣本的量不是特別關鍵，但是必須保證兩根光纖之間形成完整的液柱，這樣才能保證兩根光纖之間形成樣本液柱，使得我們的光信號能夠完整通過樣本并回流到檢測器中。

要使樣本液滴能夠順利地被拉出液柱，需要保證液滴具有足夠大的表面張力，決定液滴表面張力的主要因素是溶液中水分子的氫鍵結合力。通常情況下，溶液中所有的溶質（蛋白，DNA，RNA，鹽離子，去垢劑分子等）都會對表面張力產生影響，總的來說純化獲得的蛋白質溶液通常表面張力會較低。

因此，我們建議，在進行純蛋白、Bradford，BCA，Lowry或者蛋白Pierce 660nm試驗時，適當增加上樣量至2μL，能夠有效幫助液柱形成，提高最終檢測結果的準確和精確性。